시판되는 agarose는 완전히 순수 분리된 것은 아니며 다른 다당류나, 염, 단백질 등이 혼합되어 있으며, 이런 물질들이 포함된 정도에 따라 전기영동시 DNA가 이동되는 정도나 DNA가 gel에서 분리되는 정도가 달라진다. 따라서 효소 억제제와 nuclease가 함유되어 있지 않으며 ethidium bromide로 염색할 경우 형광
평판(slab)에서 동시에 여러 시료와 표준 물질을 분석 할 수 있는 기법.
Gel의 세공 크기를 조절하여 하전된 물질의 이동속도 결정.
대표적 Gel 물질: Agarose & Polyacrylamide.
Polyacrylamide 농도:3~20% 가능
단백질은 SDS와 polyacrylamide 전기영동(SDS-PAGE)→ 분자량에 따른 분리
PCR 산물의 확인
정제
Low-melting temperature (LMT) – 저온에서 녹는 특별한 agarose사용
Electroelution – 전류를 통해 DNA를 분리하는 방법
1) Dialysis tubing : dialysis tubing 통해 DNA분리 방법
2) NA-45(nitrocellulose)membrane – Gel 조각에 NA-45membrane붙이고 전기장 주어 분리하는 방법
High-salt extraction – 고농도 Na+에 의해 agarose g
1R-1. 올바른 micropippette 사용법에 대해서 설명하라.
-micropippette의 기본적인 설명
: micropippette의 용량의 단위는 microliter 이다. 용량은 micropippette 손잡이에 붙어있는 라벨로 알 수 있다.
그림 일반적으로 많이 사용하는 네 가지
종류의 micropippette
사진에서 왼쪽으로부터 1000 microliter (이것만 파란색
Agarose gel로부터 DNA band를 추출하여 DNA를 추출한다.
Principal:
1) Restriction enzyme
제한효소란, DNA의 특정한 염기배열을 식별하고 2중 사슬을 절단하는 endonuclease(핵산분해효소의 하나)를 뜻한다. 제한효소는 유전공학에서 재조합 DNA를 만들기 위해서 사용하는 특수한 효소로 알려져 있는데, 여기